Os Leucotrienos Estão Relacionados Ao Aumento Da Permeabilidade Vascular

A resposta inflamatória dos leucotrienos

Quando você trabalha com imunologia ou farmacologia, chega um ponto em que precisa entender o mecanismo por trás do que acontece nos tecidos durante uma reação inflamatória aguda. Os leucotrienos são mediadores lipídicos derivados do ácido araquidônico pela via da lipoxigenase. Eles não são hormônios no sentido clássico, não viajam pela corrente sanguínea até órgãos distantes esperando ação. Eles atuam localmente, de forma parácrina e autócrina, e um dos efeitos mais documentados e clinicamente relevantes é o aumento da permeabilidade vascular. O mecanismo é direto. O LTB4, o LTC4, o LTD4 e o LTE4 se ligam a receptores específicos na superfície das células endoteliais dos vasos sanguíneos. Esses receptores acionam vias de sinalização intracelular que levam ao rearranjo do citoesqueleto de actomiosina. As junções intercelulares entre as células endoteliais se abrem, as células encurtam e há um aumento do espaço para passagem de fluido e proteínas plasmáticas. O resultado é exsudação. Edema local. Preenchimento de tecido com líquido rico em fibrinogênio, albumina e outras macromoléculas que normalmente ficam restritas ao compartimento vascular. Citar leucotrienos e permeabilidade vascular sem mencionar os receptores LT não é útil. Os receptores CysLT1 e CysLT2 são os principais responsáveis pelo efeito na permeabilidade. O montelustaste, por exemplo, é um antagonista do CysLT1 usado em asma porque bloca parte desse efeito. Mas ele não cobre todas as vias. O LTD4 também ativa o CysLT2, e aí você tem permeabilidade aumentando por um caminho diferente do que o medicamento bloqueia.

Na prática de laboratório, você vê isso acontecer de forma bem clara em modelos de edema de patas em roedores induzido por LTC4. A medida de permeabilidade vascular pode ser feita com corante Evans Blue ligado à albumina. Você injeta o corante, aplica o leucotrieno na pata, espera alguns minutos e mede quanta corante vaza para o tecido. A quantidade de Evans Blue extraída do edema é proporcional à permeabilidade aumentada. Isso não é teoria. Eu fiz esse protocolo com LTC4 e LTD4 e a curva dose-resposta é consistente. O LTB4, por sua vez, tem um perfil mais voltado para quimiotaxia de neutrófilos, mas em concentrações altas também contribui para permeabilidade, só que de forma menos pronunciada e mais indireta, pela atração celular e posterior liberação de espécies reativas de oxigênio que danificam o endotélio. Um detalhe que poucas fontes mencionam é que o aumento da permeabilidade não é uniforme em todos os leitos vasculares. Nos pólos pulmonares, a resposta dos leucotrienos é particularmente intensa. Isso explica em parte por que anafilaxia e asma produzem edema brônquico tão rápido. Nos leitos esplênicos e hepáticos, a resposta pode ser atenuada pela estrutura diferente dos capilares sinusoidais. Se você está interpretando dados de permeabilidade, precisa saber em qual leito está olhando. Dados de uma região não são extrapoláveis para outra sem validação. Outro ponto que causa confusão é a diferença entre exsudação e transudação. O leucotrieno gera exsudação porque o mecanismo é inflamatório, com abertura de junções e dano endotelial transitório. Já a transudação, como na insuficiência cardíaca, é puramente hemodinâmica, por aumento de pressão hidrostática, sem envolvimento de leucotrienos. Misturar os dois mecanismos leva a interpretações erradas de ensaios farmacológicos. Eu vi relatório de tese interpretar aumento de volume de exsudato como se fosse só edema passivo, quando na verdade havia participação ativa de CysLTs. O antídoto é sempre fazer controle com antagonista de receptor de leucotrieno. Se o edema reduz, você confirmou a via.

Tem também a questão do tempo de ação. Os leucotrienos são produzidos rapidamente após estímulo, mas sua meia-vida no tecido é curta. O LTD4 é convertido rapidamente em LTE4, que é praticamente um metabólito inerte usado como marcador urinário em estudos clínicos. Então, se você está avaliando permeabilidade em tempo real, a janela é estreita. Após uns 30 minutos, a resposta já declinou significativamente. Protocolos que coletam dados depois de uma hora tendem a subestimar o efeito. Na minha experiência, o maior problema prático é a variabilidade entre linhas animais. Camundongos C57BL/6 respondem de forma diferente de BALB/c no mesmo protocolo de edema induzido por leucotrienos. A diferença pode chegar a trinta porcento no volume de exsudato. Não é ruído experimental. É genética mesmo. Se você está comparando resultados de laboratórios diferentes, essa variabilidade explica boa parte da discrepância. O workaround que eu uso é padronizar a linhagem, a idade e o peso, e incluir um controle de permeabilidade basal em cada lote de animal. Sem esse controle, você não sabe se uma diferença é do tratamento ou do lote. Outra limitação importante é que os antagonistas de CysLT disponíveis no mercado não são perfeitos. O zafirlucaste e o montelucaste bloqueiam o CysLT1, mas não o CysLT2. Estudos mais recentes mostram que o CysLT2 também participa da permeabilidade, especialmente em vasos de microcirculação. Se seu modelo depende fortemente do CysLT2, o uso desses antagonistas vai dar uma falsa sensação de segurança. O tratamento reduz parte do efeito, mas não todo. Em algumas publicações, isso foi interpretado como falta de envolvimento de leucotrienos, quando na verdade o receptor alvo era outro.

A via da 5-lipoxigenase é a via clássica de produção dos leucotrienos, mas não a única. A 12-lipoxigenase e a 15-lipoxigenase produzem outros mediadores lipidicos que modulam a permeabilidade de forma independente. O ALE (ácido 15-hidroxi-eicosatetraenóico) é um produto da 15-LOX que tem efeito dual: em algumas circunstâncias aumenta a permeabilidade, em outras promove resolução da inflamação. Isso significa que bloquear apenas a 5-LOX com drogas como a zileutona pode não resolver completamente o aumento de permeabilidade em modelos onde a 15-LOX está ativa. A literatura mostra isso claramente em modelos de colite e de lesão pulmonar aguda. Se você precisa avaliar permeabilidade vascular em tecido humano ou em culturas de células endoteliais humanas, o método de resistência elétrica transendotelial (TER) é mais preciso do que medir extravasamento de proteínas. O TER mede a integridade das junções em tempo real, sem necessidade de marcadores externos. Uma queda de TER indica abertura das junções. Eu usei esse método em endotélios umbilicais humanos cultivados e a resposta ao LTD4 foi rápida, com queda significativa em menos de cinco minutos. O efeito foi reversível com antagonista de CysLT1 em concentrações que não afetaram a viabilidade celular. Há também a questão das interações com outros mediadores. Os leucotrienos nunca atuam sozinhos em um contexto inflamatório. Histamina, bradicinina, tromboxano, PAF. Todos aumentam permeabilidade por mecanismos distintos. A histamina age via receptores H1, abrindo poros endoteliais. A bradicinina age via B2, ativando óxido nítrico e prostaciclina. O leucotrieno age via CysLT, rearranjando citoesqueleto. A sobreposição de efeitos faz com que o bloqueio de um único caminho raramente normalize a permeabilidade completamente. Em modelos experimentais, combinamos bloqueadores de múltiplos receptores justamente para capturar o efeito total. Sozinho, o antagonista de leucotrieno reduz a resposta em cerca de quarenta a cinquenta por cento nos modelos mais estudados.

Para quem está começando nesse campo, o erro mais comum é não controlar a concentração do leucotrieno aplicado. LTC4 é instável em solução aquosa. Ele degrada rapidamente para LTD4 e depois LTE4. Se você prepara uma solução e deixa descansar trinta minutos antes de usar, a concentração efetiva de LTC4 já caiu significativamente. A recomendação é trabalhar com solução fresca, proteger da luz e usar dentro de vinte minutos. A estabilidade melhora se você adicionar albumina sérica bovina à solução, pois a albumina se liga ao leucotrieno e protege contra degradação não específica. Isso muda o perfil cinético da resposta, mas é aceitável para a maioria dos protocolos. O LTE4 urinário é usado como biomarcador de atividade de leucotrienos em humanos, mas ele tem limitações. A excreção renal varia com função renal, hidratação e taxa de filtração glomerular. Em pacientes desidratados ou com insuficiência renal leve, o LTE4 urinário pode ser subestimado independentemente da produção tecidual. Se você está interpretando dados clínicos, precisa correlacionar com outros marcadores, como F2-isoprostana ou citocinas pró-inflamatórias, para ter uma visão mais completa. Resumindo o essencial sem repetir o óbvio: os leucotrienos aumentam a permeabilidade vascular por ativação de CysLT1 e CysLT2, com consequente rearranjo do citoesqueleto endotelial e abertura de junções intercelulares. O efeito é rápido, localizado e parte de uma cascata inflamatória muito mais ampla. Bloquear apenas um receptor ou uma via de síntese raramente resolve o problema todo. A interpretação correta dos dados depende de controle adequado de variáveis experimentais, uso de soluções frescas, compreensão dos limites dos antagonistas disponíveis e reconhecimento de que o sistema é redundante. Se você levar essas questões em conta, os dados serão consistentes. Se não levar, vai gastar tempo e reagentes sem aprender nada novo com a Variabilidade dos resultados.